應用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡觀察多種生物活性物質對門細胞內(nèi)鈣的影響

細胞內(nèi)離于鈣濃度的變化是鈣信號作為細胞通訊第二信使的物質基礎，因而測定靜止態(tài)和激活態(tài)細胞中離子鈣濃度十分重要。過去，人們采用生物發(fā)光蛋白、金屬餡指示劑、ca’選擇性微電極等方法只能采用微注射方法觀察少數(shù)大型細胞的離子鈣。80年代以來，隨著ca2’特異熒光指示劑和顯微熒光光度計的聯(lián)合應用，人們才開始通過對細胞無刨性納（：az’測定方法研究ca”信號。直到zui近幾年，徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡的應用大大加速了人們對單個細胞離子鈣及其亞細胞區(qū)域分布的研究。應用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡和ca”特異的熒光指示劑f1Mo—3，可觀察多種生物活性物質對1。I工—PN細胞離子鈣的影響。I上c—PKl細胞是來源十豬腎小管1：皮的細胞系，已得到學術界的*。它與近端小管上皮細胞有一些相同的轉運功能，而其對刺激的反應卻與亨氏拌升支粗段相似。因此，人們常用N上PRl細胞代替近端小管上皮細胞研究物質的轉運，而代替亨氏拌升文物段上皮細胞研究其對激素的反應。上也有人應用I‘I‘c—PKl細胞研究腎小管上皮細胞的細胞內(nèi)鈣信使。u，c—PKl細胞在20mm以內(nèi)特與外界交換50％的細胞總鈣，剩余的細胞鈣與外界交換較侵，稱為侵交換鈣池。在細胞核、高爾基器以及胞漿的其它區(qū)域，均包括快交換鈣池和慢交換鈣他兩部分。

徠卡激光共聚焦顯微鏡用精氨酸加壓素（AvP），在富鈣環(huán)境中培養(yǎng)的I，I，c—PKl細胞如果不受外界刺激，其細胞核和細胞質的離子鈣濃度是一樣的；受到AvP、ATP或EIrF刺激后，細胞總離于鈣過性增高刷巳細胞核離子鈣升高較細胞質離子鈣升高更為突出。然而，在無鈣的條件r培養(yǎng)兒I‘cPxl細胞受刺激后雖然仍出現(xiàn)一過性的總離子鈣升高，但細胞核和細胞質離子鈣升高的幅度差別不大。在徠卡激光共聚焦顯微鏡進一步研究發(fā)現(xiàn)，無論在無鈣還是富鈣的環(huán)境中，而用AVP預處理后，再用人TP刺激N。C—PKl細胞所引起的離子鈣變化總不如未用AvP處理時。不同生物活性物質的受體類型不同，它們和1用的磷酸脂酶c同工酶也不同，從而導致不同鈣庫的動員。

備注：應用徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡觀察多種生物活性物質對門細胞內(nèi)鈣的影響的部分技術文章由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司編輯整理上傳。