徠卡熒光顯微鏡本體
    徠卡熒光顯微鏡是任何顯微木的基本工具，它的主要作用是使被撿標(biāo)本圖象得到不同程度的放大。在徠卡熒光顯微鏡中，熒光光源裝置是提供一定波長(zhǎng)的激發(fā)光使被校標(biāo)本受激發(fā)射熒光，再通過(guò)顯微鏡的物鏡，B鏡系統(tǒng)使熒光圖象放大以供觀察，因此，一般來(lái)說(shuō)，任何顯微鏡都可以用于熒光顯微術(shù)。不玖由于徠卡熒光顯檄鏡所放大的象是熒光圖象，必須根據(jù)熒光產(chǎn)生和表現(xiàn)的特點(diǎn)，因此在使用方法—L略有講災(zāi)。
    一般的徠卡熒光顯微鏡的光學(xué)元件，大都果用普通光學(xué)玻璃制造。它們對(duì)30 A以上的長(zhǎng)波紫外線和可見(jiàn)光能很好地透過(guò)，因此完滿足——殷熒光顯微術(shù)的要求，只是在個(gè)別情況下，當(dāng)標(biāo)本必須用短波紫外線激發(fā)時(shí)，才需用石英玻璃或特種玻璃的聚光鏡和反射執(zhí)這時(shí)殘破片也必須是特制晰但在進(jìn)射光顯檄術(shù)時(shí)，物鏡和目鏡只需用普通光學(xué)玻璃即可。如在反射光顯微術(shù)時(shí)，則物鏡必須能透過(guò)紫外光的。現(xiàn)就熒光顯微木的特點(diǎn)，介紹一下徠卡熒光顯微境備部分的性能特點(diǎn)。
    （1）反光鏡  其反光層以鍍鋁為沉因?yàn)殇X對(duì)紫外光和可見(jiàn)光的紫藍(lán)區(qū)吸收少，反射率達(dá)90％以上，而鍍銀的反射串只達(dá)70％，另外應(yīng)采用外反射，以避免光線來(lái)回經(jīng)過(guò)玻璃而引起損失。同時(shí)要使用平面反光鏡而不使用凹面反光鼠這樣使光源射來(lái)的光線簽水平行。
    （2）聚光器  聚光器有三種；明場(chǎng)聚光器、暗場(chǎng)聚光器和相襯熒光聚光器。
    ①明場(chǎng)聚光器  假如標(biāo)本可用較長(zhǎng)的光波來(lái)激發(fā)成熒光，則習(xí)，9阿貝聚光鏡，而微列的焚光或須用短波紫外光作光源的話，則必須用石英玻璃和熒石玻璃等材料制作的聚光鏡，否則，第外光將會(huì)全部被普通玻璃所吸收。另外，由于油浸鎮(zhèn)頭的香柏油會(huì)自發(fā)熒光，會(huì)擾亂觀院所以不空使用，必須使用不發(fā)熒光的化學(xué)純甘油或檀香油等。
    ②暗場(chǎng)聚光器  由于使用暗場(chǎng)聚光器時(shí)，激發(fā)光不直接進(jìn)入物鏡，而不致直接射入眼睛，這樣激發(fā)濾片可以大大減薄，從而顯著地增大了激發(fā)光的強(qiáng)度，抑制濾片也可以很薄，甚至可以不用。
    由于暗場(chǎng)熒光顯微木時(shí)，它的背景是黑的，放增強(qiáng)了熒光圖象的亮度和反襯度，這梆，不僅提高了圖象的質(zhì)量、觀察舒適，而員還能觀察出明場(chǎng)觀察時(shí)分辨不出來(lái)的細(xì)微頤粒，因此徠卡熒光顯微鏡具有超顯微木的意義。
    （3）相樹(shù)熒光聚光它與普通聚光器相同，只是它的透鏡能透過(guò)紫外光，如與相襯物鏡配合使用，則可作相襯顯微鏡，也可作徠卡熒光顯微鏡，在同時(shí)有兩個(gè)光源一個(gè)是汞燈作為熒光激發(fā)光一個(gè)是白熾燈作為相襯照明）或者是一個(gè)光源通過(guò)適當(dāng)安排分成兩條光路。在這樣的情況T，則可同時(shí)進(jìn)行相襯，熒光聯(lián)合觀鼠既能看到熒光圖象，又能看到相襯圖抵在某些情況T，有助于目標(biāo)的定位和結(jié)果的正確判斷。
徠卡熒光顯微鏡是普通顯微術(shù)的重大發(fā)展。它具有*的*性。徠卡熒光顯微鏡是在黑閱內(nèi)背景下觀察標(biāo)‘杠的形色圖象，有良好的反劉，故觀察清楚、方便，易哥：鑒別，眼睛也不員疲勞。由于徠卡熒光顯微鏡的熒光染色素的濃度極?。▋x1：I ooo00）便能發(fā)出明亮的熒光，因此一般油機(jī)體眾說(shuō)是無(wú)動(dòng)的，為活體觀察，如研究功能器官的過(guò)程和細(xì)微糾構(gòu)，某些代謝過(guò)程的變化等，提供了廣泛的可能性。另外，徠卡熒光顯微鏡的熒光色素染色法比較簡(jiǎn)軋時(shí)間路標(biāo)木制作客只，特別適于快速工億如傳染病的快速診斷等。
  徠卡熒光顯微鏡——反射光熒光裝置
  徠卡熒光顯微鏡對(duì)于觀察透明度差的標(biāo)本，以及各種活體組織時(shí)，需采用反射光熒光裝置。徠卡熒光顯微鏡反射光熒光裝置的特點(diǎn)是：從光源來(lái)的混合光射到干涉分光濾鏡后，波長(zhǎng)短的部分（榮外和紫藍(lán)）由于濾鏡上鍍膜的性質(zhì)而反射，當(dāng)濾鏡對(duì)向光源呈45。傾斜時(shí)，則垂直射向物鏡，’經(jīng)物鏡射向標(biāo)久使標(biāo)本受到激發(fā)，這時(shí)物鎮(zhèn)直接起看聚光器的作用，同時(shí)波長(zhǎng)氏的部分（綠、黃、紅等）能透過(guò)濾鏡比因此不向物鏡方向反射，濾鏡起到了激發(fā)濾板的作用，由于標(biāo)本的熒光是處在可見(jiàn)光長(zhǎng)波區(qū)；故對(duì)濾鏡也是可以透過(guò)的，因此能透射到目鏡以供觀察。根拇所需要激發(fā)光不同，干涉分光濫鏡可以更換。
    徠卡熒光顯微鏡——熒光顯微鏡的持點(diǎn)
    徠卡熒光顯微鏡是普通顯微術(shù)的重大發(fā)展。它具有*的*性。徠卡熒光顯微術(shù)是在黑閱內(nèi)背景下觀察標(biāo)‘杠的形色圖象，有良好的反劉，故觀察清楚、方便，易哥：鑒別，眼睛也不會(huì)疲勞。由于熒光染色素的濃度極?。▋x1：I ooo00）便能發(fā)出明亮的熒光，因此一般油機(jī)體眾說(shuō)是無(wú)動(dòng)的，為活體觀察，如研究功能器官的過(guò)程和細(xì)微糾構(gòu)，某些代謝過(guò)程的變化等，提供了廣泛的可能性。另外，英光色素染色法比較簡(jiǎn)軋時(shí)間路標(biāo)木制作客只，特別適于快速工億如傳染病的快速診斷等。
    徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術(shù)可用明視場(chǎng)改暗視場(chǎng)方洗，但—般用睹權(quán)場(chǎng)效果較好，因?yàn)樗a(chǎn)生的現(xiàn)場(chǎng)背景是黑的，圖象反襯強(qiáng)，過(guò)沒(méi)有明視場(chǎng)方便。至于透射熒光還是反射熒光，一般來(lái)說(shuō)，反射熒光應(yīng)用范圍廣一以它不僅適用觀察普通標(biāo)刺，而且還能現(xiàn)察不適明標(biāo)本。
    徠卡熒光顯微鏡根據(jù)激發(fā)光波長(zhǎng)的特點(diǎn)，熒光顯微術(shù)可用紫外光或紫藍(lán)光激發(fā)。蒙外光的特點(diǎn)在觀察機(jī)體組織的自體熒光＜如核酸及金剛石等）在組織華工d：中便于區(qū)別背景熒光和染色目標(biāo)的熒光。但陜點(diǎn)是：常常會(huì)引起標(biāo)4；熒光的光致淬滅，標(biāo)本難以重復(fù)觀察，并且沙顯微攝影發(fā)生團(tuán)難。另外對(duì)活體標(biāo)本有叨顯的殺傷作用，對(duì)長(zhǎng)期從事這項(xiàng)工作人員的暇睛也有傷害。特別是對(duì)絕大多數(shù)的熒光色素來(lái)說(shuō)，紫外區(qū)不是zui大的光譜吸收風(fēng)因而不能得到先分的激發(fā)。而紫藍(lán)光卻沒(méi)有以上—些缺點(diǎn)，但不足的是不能激發(fā)組織的自體熒光，因此不適于研究組織的白體熒光結(jié)構(gòu)。
    結(jié)果徠卡熒光顯微鏡所觀察的熒光圖象，主要以兩個(gè)指標(biāo)：劉斷結(jié)果，一是形態(tài)學(xué)特征，二是熒光的亮度。在免疫焚光工作巾，尤其是這樣，必須將兩者結(jié)合起來(lái)綜合判斷不可偏皮。糾果記錄是根據(jù)主觀指標(biāo)或客觀指標(biāo)，但一般常是憑工作者日力觀察的主觀指標(biāo)由于這是定性的觀察，所以記錄的度較差。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，采用客觀指標(biāo)記錄結(jié)果已經(jīng)開(kāi)始應(yīng)用，有以下幾點(diǎn)：
    ①用不同序度的中性濾片插入激發(fā)濾片和標(biāo)本之間的光路中，以看焚光減駒的極度；
    ②不同標(biāo)本以相同的隕光時(shí)間進(jìn)行顯檄攝影，然后用光密度計(jì)測(cè)定膠卷圖象；
    ③直接用熒光計(jì)測(cè)熒光色素和兔疫熒光染色的鏡下標(biāo)本，
    ④用光敏電池漏光表Z；愧網(wǎng)象的亮度，或者與掃描裝置結(jié)備對(duì)視場(chǎng)的特定部位進(jìn)行掃描等，如熒光顯微光度計(jì)。
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