徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術(shù)的特點(diǎn)
熒光顯微術(shù)是普通顯微術(shù)的重大發(fā)展。它具有*的*性。熒光顯微術(shù)是在黑暗的背景下觀(guān)察標(biāo)本的彩色圖像，有良好的反襯，故觀(guān)察清楚、方便，易于鑒別，眼睛也不易疲勞。由于熒光染色素的濃度極?。▋x1：100000）便能發(fā)出明亮的熒光，因此一般油機(jī)體眾說(shuō)是無(wú)毒的，為活體觀(guān)察，如研究功能器官的過(guò)程和細(xì)微結(jié)構(gòu)，某些代謝過(guò)程的變化等，提供了廣泛的可能性。另外，熒光色素染色法比較簡(jiǎn)單，時(shí)間短，標(biāo)本制作容易，特別適于快速工作，如傳染病的快速診斷等。
（1）熒光顯微術(shù)方法的選擇徠卡熒光顯微鏡可用明場(chǎng)或暗場(chǎng)方法，—般用暗場(chǎng)效果較好，因?yàn)樗a(chǎn)生的現(xiàn)場(chǎng)背景是黑的，圖象反襯強(qiáng)，不過(guò)沒(méi)有明場(chǎng)方便。至于透射熒光還是反射熒光，一般來(lái)說(shuō)，反射熒光應(yīng)用范圍廣一些，它不僅適用觀(guān)察普通標(biāo)本片，而且還能現(xiàn)察不適明標(biāo)本。
根據(jù)激發(fā)光波長(zhǎng)的特點(diǎn)，熒光顯微術(shù)可用紫外光或紫藍(lán)光激發(fā)。紫外光的特點(diǎn)在可觀(guān)察機(jī)體組織的自體熒光（如核酸及金剛石等）在組織學(xué)工作中便于區(qū)別背景熒光和染色目標(biāo)的熒光。但缺點(diǎn)是：常常會(huì)引起標(biāo)本熒光的光致淬滅，標(biāo)本難以重復(fù)觀(guān)察，并且使徠卡顯微攝影發(fā)生團(tuán)難。另外對(duì)活體標(biāo)本有叨顯的殺傷作用，對(duì)長(zhǎng)期從事這項(xiàng)工作人員的暇睛也有傷害。特別是對(duì)絕大多數(shù)的熒光色素來(lái)說(shuō)，紫外區(qū)不是zui大的光譜吸收風(fēng)因而不能得到先分的激發(fā)。而紫藍(lán)光卻沒(méi)有以上—些缺點(diǎn)，但不足的是不能激發(fā)組織的自體熒光，因此不適于研究組織的白體熒光結(jié)構(gòu)。對(duì)于個(gè)別熒光色素，知羅達(dá)明R200，可用波長(zhǎng)更長(zhǎng)的藍(lán)綠光作為激發(fā)光為佳。
（2）結(jié)果記錄方法徠卡熒光顯微術(shù)所觀(guān)察的熒光圖象，主要以?xún)蓚€(gè)指標(biāo)判斷結(jié)果，一是形態(tài)學(xué)特征，二是熒光的亮度。在免疫熒光工作中，尤其是這樣，必須將兩者結(jié)合起來(lái)綜合判斷，不可偏廢。結(jié)果記錄是根據(jù)主觀(guān)指標(biāo)或客觀(guān)指標(biāo)，但一般常是憑工作者目力觀(guān)察的主觀(guān)指標(biāo)由于這是定性的觀(guān)察，所以記錄的度較差。
隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，采用客觀(guān)指標(biāo)記錄結(jié)果已開(kāi)始應(yīng)用。
①用不同厚度的中性濾片插入激發(fā)濾片和標(biāo)本之間的光路中，以看熒光減弱的極度；
②不同標(biāo)本以相同的曝光時(shí)間進(jìn)行顯微攝影，然后用光密度計(jì)測(cè)定膠卷圖象；
③直接用熒光計(jì)測(cè)熒光色素和兔疫熒光染色的鏡下標(biāo)本；
④用光敏電池曝光表測(cè)定圖象的亮度，或者與掃描裝置結(jié)合，對(duì)視場(chǎng)的特定部位進(jìn)行掃描等，如徠卡熒光顯微光度計(jì)。
